梯度PCR擴(kuò)增儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴(kuò)增儀。適用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)、司法科學(xué)、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)、臨床診斷、流行病學(xué)、遺傳學(xué)、基因芯片、基因檢測(cè)、基因克隆、基因表達(dá)等領(lǐng)域以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Picymerase Chain Reaction,PCR)為特征的、以檢測(cè)DNA/RNA為目的的各種病原體檢測(cè)及基因分析。
PCR反應(yīng)能否成功,退火溫度是關(guān)鍵,梯度PCR儀每個(gè)孔的溫度可以在范圍內(nèi)按照梯度設(shè)置,根據(jù)結(jié)果,一步就可以摸索出最適反應(yīng)條件。一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同的DNA片段其適合的退火溫度不同,通過(guò)設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的適合退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣可節(jié)省試驗(yàn)時(shí)間、提高實(shí)驗(yàn)效率,又節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)。
梯度PCR擴(kuò)增儀的日常維護(hù)保養(yǎng)工作:
1、樣品池的清洗
先打開(kāi)蓋子,然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體,用棉簽吸干剩余液體,設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運(yùn)行,讓殘余液體揮發(fā)去除,一般5~10min即可。
2、熱蓋的清洗
對(duì)于熒光定量基因擴(kuò)增儀,當(dāng)有熒光污染出現(xiàn),而且這一污染并非來(lái)自樣品池時(shí),或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時(shí),需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面,確保樣品池的孔干凈,無(wú)污物阻擋光路。
3、儀器外表面的清洗
清洗梯度PCR擴(kuò)增儀的外表面可以除去灰塵和油脂,但達(dá)不到消毒的效果,選擇沒(méi)有腐蝕性的清洗劑對(duì)基因擴(kuò)增儀的外表面進(jìn)行清洗。
4、更換保險(xiǎn)絲
先將基因擴(kuò)增儀關(guān)機(jī),拔去插頭,打開(kāi)電源插口旁邊的保險(xiǎn)盒,換上備用的保險(xiǎn)絲,觀察是否恢復(fù)正常。